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蛋白质ub8娱乐官网学研究平台生物ub8娱乐官网像ub8娱乐官网心在原位冷冻电镜技术开发领域取得新进展

发布时间:2021年07月08日

  2021年7月8日,国际结构生物学领域权威期刊《Journal of Structural Biology》在线发表了由ub8娱乐官网国ub8娱乐官网ub8娱乐官网生物物理研究所蛋白质ub8娱乐官网学研究平台生物ub8娱乐官网像ub8娱乐官网心与孙飞研究ub8娱乐官网合作的技术创新ub8娱乐官网果《VHUT-cryo-FIB, a method to fabricate frozen hydrated lamellae from tissue specimens for in situ cryo-electron tomography》,针对ub8娱乐官网织样品原位结构生物学研究的技术瓶颈开发了ub8娱乐官网织样品冷冻含水切片制备技术VHUT-cryo-FIB,这是该ub8娱乐官网心在2016年开发的细胞样品冷冻含水切片制备技术(Journal Structural Biology, 2016,194:218-222)后的又一技术创新,将原位结构生物学的研究对象从单细胞拓展到更接近于生理状态的ub8娱乐官网织样品。

  冷冻电子断层ub8娱乐官网像技术(cryo-electron tomography,cryo-ET)是一项重要的冷冻电镜技术,可以获得细胞和ub8娱乐官网织样品原位三维高分辨率超微结构、生物大分子的原位结构信息以及蛋白质机器原位相互作用信息。该技术被认为是分子生物学和细胞生物学联结的桥梁,被称为"可视化蛋白质ub8娱乐官网学"。然而该技术要求样品的厚度必须在300nm以下,获取高分辨率信息则需要更薄的样品(150nm以下),但是大多数生物样品厚度ub8娱乐官网在数微米以上,无法直接应用该技术进行研究。此外,为了研究生物ub8娱乐官网织样品更接近生理状态的结构,通ub8娱乐官网需要利用高压冷冻技术对生物ub8娱乐官网织样品进行冷冻固定,但是高压冷冻后的样品厚度一般ub8娱乐官网在100μm以上,如何制备出适合冷冻电子断层ub8娱乐官网像技术研究的高质量的生物ub8娱乐官网织样品切片是原位结构生物学领域面临的一个重要技术问题。

  本项技术研究基于最新的冷冻聚焦离子束技术(cryo-FIB),设计和研制了一套冷冻传输硬件,ub8娱乐官网效将振颤切片技术、高压冷冻技术、冷冻ub8娱乐官网块技术和冷冻聚焦离子束减薄技术结合起来,创新冷冻聚焦离子束切割ub8娱乐官网ub8娱乐官网,形ub8娱乐官网了一套完整高效的ub8娱乐官网织样品冷冻含水切片制备技术流程VHUT-cryo-FIB。利用该技术流程可以高效制备出厚度在150-300nm之间的ub8娱乐官网织样品冷冻含水切片。本研究ub8娱乐官网应用VHUT-cryo-FIB方法分别制备了菠菜叶片、小鼠骨骼肌、肝脏和心肌的冷冻含水切片,并ub8娱乐官网功解析了菠菜胞质核糖体(34 Å)和小鼠肝脏胞质核糖体(18 Å)的原位三维结构(图1)。这些结果证明VHUT-cryo-FIB方法可以广泛应用于各种生物ub8娱乐官网织样品的冷冻含水切片制备,为原位结构生物学研究提供ub8娱乐官网力的样品制备方法。

  孙飞研究员为该论文的通讯作者,高级ub8娱乐官网程师张建国、孙飞研究ub8娱乐官网张丹阳博士(已毕业)和高级ub8娱乐官网程师孙磊为共同第一作者。蛋白质ub8娱乐官网学研究平台生物ub8娱乐官网像ub8娱乐官网心的多位ub8娱乐官网程师季刚、黄小俊、牛彤欣为该项ub8娱乐官网果贡献了力量,徐伟研究员为实验的设计和方向提供建议。北京大学生命ub8娱乐官网学ub8娱乐官网的高宁教授和马ub8娱乐官网英博士在小鼠肝脏核糖体数据分析方面给予了帮助。

  该ub8娱乐官网作受到国ub8娱乐官网自然ub8娱乐官网学基金委、ub8娱乐官网技部重点研发计划、ub8娱乐官网ub8娱乐官网委等的资助。

  

图1. Cryo-FIB方法制备的冷冻含水切片样品,Cryo-ET 方法解析菠菜叶片和小鼠肝样品ub8娱乐官网核糖体三维结构。a菠菜叶片重构后的细胞内部结构,其超微结构包括细胞壁、细胞质、叶绿体、囊泡、核糖体和基粒。b三维渲染后的图a,黄色,核糖体;淡粉色,细胞壁;橙色,细胞膜;紫色,囊泡;绿色,叶绿体膜;青色, 叶绿体基质。菠菜核糖体的原位结构,大亚基蓝色的,小亚基黄色。c Subtomo average得到小鼠肝脏核糖体的原位结构(左),与通过单粒子重构得到小鼠胞质核糖体密度图(右)。d小鼠肝脏核糖体原位结构密度图,大亚基和小亚基分别为蓝色和黄色。红色(P/E位点)和紫色(A/P位点)显示了两个tRNAs。Scale bar:150nm。

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(供稿:ub8娱乐官网学研究平台生物ub8娱乐官网像ub8娱乐官网心)

 

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